ഡി.എൻ.എ. സീക്വൻസിങ്
ഡിഎൻഎ സീക്വൻസിംഗിൽ, ഡിഎൻഎ തന്മാത്രയിലെ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളുടെ (പഞ്ചസാരയും ഫോസ്ഫേറ്റും ഉള്ള ഡിഎൻഎ അടിസ്ഥാന തന്മാത്ര) ക്രമം നിർണ്ണയിക്കാൻ ബയോകെമിക്കൽ രീതികൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഏറ്റവും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതി സാങ്കർ ചെയിൻ അവസാനിപ്പിക്കൽ രീതിയാണ്. ഡിഎൻഎ നാല് വ്യത്യസ്ത അടിത്തറകളുള്ളതിനാൽ, നാല് വ്യത്യസ്ത സമീപനങ്ങളുണ്ട്.
ഓരോ സമീപനത്തിലും ക്രമീകരിക്കേണ്ട ഡിഎൻഎ, ഒരു പ്രൈമർ (സീക്വൻസിംഗിനായി ആരംഭ തന്മാത്ര), ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് (ഡിഎൻഎ വിപുലീകരിക്കുന്ന എൻസൈം), ആവശ്യമായ നാല് ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളുടെ മിശ്രിതം എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഈ നാല് സമീപനങ്ങളിൽ ഓരോന്നിനും വ്യത്യസ്തമായ ഒരു അടിത്തറ രാസപരമായി പരിഷ്‌ക്കരിച്ച് അത് സംയോജിപ്പിക്കാൻ കഴിയുന്ന തരത്തിൽ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിനായി ഒരു പ്രവർത്തന പോയിന്റും നൽകുന്നില്ല. ഇത് ചെയിൻ അവസാനിപ്പിക്കുന്നതിലേക്ക് നയിക്കുന്നു. ഈ രീതി വ്യത്യസ്ത നീളത്തിലുള്ള ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ ഉൽ‌പാദിപ്പിക്കുന്നു, അവയെ രാസപരമായി ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് എന്ന് വിളിക്കുന്നു. തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന തരംതിരിക്കൽ ഓരോ അടിത്തറയും വ്യത്യസ്ത ഫ്ലൂറസെന്റ് നിറത്തിൽ ലേബൽ ചെയ്തുകൊണ്ട് സീക്വൻസഡ് ഡിഎൻഎ വിഭാഗത്തിലെ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളുടെ ശ്രേണിയിലേക്ക് വിവർത്തനം ചെയ്യാൻ കഴിയും.
ഡിഎൻഎ ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ
വ്യത്യസ്ത ഉത്ഭവമുള്ള ഡിഎൻ‌എയുടെ രണ്ട് ഒറ്റ സരണികൾ തമ്മിലുള്ള സാമ്യം തെളിയിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന തന്മാത്ര ജനിതക രീതിയാണ് ഡിഎൻഎ ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ. ഒരു ഡിഎൻഎ ഇരട്ട സ്‌ട്രാൻ‌ഡ് എല്ലായ്‌പ്പോഴും രണ്ട് പൂരക സിംഗിൾ സ്ട്രോണ്ടുകളാൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു എന്ന വസ്തുത ഈ രീതി ഉപയോഗപ്പെടുത്തുന്നു. ഒരൊറ്റ സ്ട്രോണ്ടുകളും പരസ്പരം കൂടുതൽ സമാനമാണ്, കൂടുതൽ അടിത്തറകൾ വിപരീത അടിത്തറയുള്ള ഒരു ദൃ connection മായ കണക്ഷൻ (ഹൈഡ്രജൻ ബോണ്ടുകൾ) ഉണ്ടാക്കുന്നു അല്ലെങ്കിൽ കൂടുതൽ അടിസ്ഥാന ജോഡികൾ രൂപം കൊള്ളുന്നു.
വ്യത്യസ്ത ബേസ് സീക്വൻസുള്ള രണ്ട് ഡിഎൻഎ സ്‌ട്രാൻഡുകളിലെ വിഭാഗങ്ങൾക്കിടയിൽ അടിസ്ഥാന ജോടിയാക്കലുകൾ ഉണ്ടാകില്ല. പുതുതായി രൂപംകൊണ്ട ഡിഎൻഎ ഇരട്ട സ്ട്രാന്റ് വേർതിരിക്കുന്ന ദ്രവണാങ്കം നിർണ്ണയിച്ച് ആപേക്ഷിക സംയുക്തങ്ങളുടെ എണ്ണം ഇപ്പോൾ നിർണ്ണയിക്കാനാകും. ഉയർന്ന ദ്രവണാങ്കം, കൂടുതൽ പൂരക അടിത്തറകൾ പരസ്പരം ഹൈഡ്രജൻ ബോണ്ടുകൾ സൃഷ്ടിക്കുകയും രണ്ട് ഒറ്റ സ്ട്രോണ്ടുകൾക്ക് സമാനമാവുകയും ചെയ്യുന്നു. ഒരു ഡിഎൻഎ മിശ്രിതത്തിലെ നിർ‌ദ്ദിഷ്‌ട അടിസ്ഥാന ശ്രേണി കണ്ടെത്തുന്നതിനും ഈ രീതി ഉപയോഗിക്കാം. ഈ ആവശ്യത്തിനായി, കൃത്രിമമായി രൂപംകൊണ്ട ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ (ഫ്ലൂറസെന്റ്) ഡൈ ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്യാൻ കഴിയും. ഇവ അനുബന്ധ ബേസ് സീക്വൻസ് അടയാളപ്പെടുത്താൻ സഹായിക്കുന്നു, അങ്ങനെ അത് ദൃശ്യമാക്കും.
ഈ ശ്രേണിയിലെ എല്ലാ ലേഖനങ്ങളും:
